Анализ методики определения антимикробной активности меда и практика ее использования показывают, что она имеет ряд существенных недостатков. По данной методике выявляют бактериостатическую активность, хотя при определении этого показателя на жидкой питательной среде затруднен учет результатов из-за мутности раствора меда. Для получения достоверных данных антибактериальной активности целесообразно определять не только бактериостатическое действие меда, но и его бактерицидность.
При методике рекомендовано в качестве тест-культуры использовать обыкновенный протей, но не указан штамм. Это позволяет использовать любые штаммы, что методически недопустимо.
Для приготовления тест-культуры не определена точно концентрация микробных тел, а для разведения рекомендуется дистиллированная вода (вода вызывает плазмоптиз бактериальных клеток). Мед натуральный имеет рН = 3,5-4,0. Смешивание его с водой, а потом с мясо-пептонным агаром (МПА) снижает рН, что сказывается на деятельности бактерий.
Учитывая вышеизложенные недостатки, попытались модифицировать методику определения антибактериальной активности меда натурального.
Так, для выбора лучшей культуры микроорганизмов как тест-объектов в опытах использовали эталонные штаммы. Рабочий раствор меда готовили в стерильной колбе (500 мл) на МПА (75 г меда - 75 мл МПА). Колбу, закрытую стерильной пробкой, встряхивали до полного растворения меда.
Для приготовления бактериальной взвеси использовали 24-часовую микробную культуру, выращенную на скошенном МПА в пробирке при 37°С, и разводили физиологическим раствором до тех пор, пока не получали взвесь, содержащую 10 000 микробных тел в 1 мл, которая и являлась рабочим разведением культуры при сравнении со стандартом мутности.
Для определения бактериостатической активности меда посев бактерий проводили на жидкую питательную среду, содержащую мед в прогрессивно снижающихся концентрациях.
Для повышения достоверности результатов поставлено два контрольных опыта в четырехкратной повторности. Штативы держали 18-20 ч в термостате при 37°С. Рост (отсутствие роста) микроорганизмов определяли по помутнению растворов в опытных пробирках, сравнивая их с контрольными.
Для определения бактерицидности меда натурального петлей делали высев с каждой пробирки независимо от помутнения бульона на секторы чашки Петри с МПА рН 7,2-7.4 (чашку делили не более чем на шесть секторов). Исключение составлял посев из пробирок, где исследовали бактерицидное действие меда на культуру обыкновенного протея, который дает ползучий рост, и высев поэтому делали из каждой пробирки на отдельную чашку с агаром. Чашки с посевами держали при + 37°С 18-20 ч.
